T7 RNA聚合酶的前世今生
噬菌体T7 RNA聚合酶(T7 RNA Polymerase,T7 RNAP)于1970年首次从噬菌体T7感染的大肠杆菌细胞中分离出来,是催化RNA合成的最简单的酶之一。T7噬菌体是一种中等大小的噬菌体,其线状双螺旋DNA由39, 936 bp组成。39, 936 bp T7线性基因组的关键基因可以分为三大类,并且这三大类基因在T7感染周期的不同阶段进行表达:I类基因在感染早期表达,为噬菌体生长建立有利条件;II类是主要参与DNA复制、蛋白编码的基因;III类基因则在噬菌体生长的后期表达,主要编码结构基因。多年来,T7 RNAP已广泛应用于原核生物和真核生物中的高水平基因表达,并在生物学其他领域的应用得到扩展,例如RNA干扰、RNA编辑、合成基因电路、构建Vaccinia / T7混合系统等(如图1)。如在工业生物技术中,基于T7 RNAP的表达系统,研究者开发出谷氨酸棒杆菌MB001和大肠杆菌BL21(DE3)两个底盘菌株。由于T7 RNAP在原核环境中产生,因此T7 RNA聚合在真核环境中表达会遇到以下三种困难:i)mRNA加工,ii)加帽,iii)甲基化,和iv)真核环境中的多腺苷酸化。
2538 人阅读发布时间:2022-07-11 13:51