狂犬病是一种疫苗可预防的人畜共患病毒性疾病，影响中枢神经系统。一旦出现临床症状，狂犬病致死率几乎100%。犬是我国狂犬病的主要传染源，约占95%，其次为猫。接种狂犬病疫苗是预防狂犬病的有效方法。 

狂犬疫苗研发上市情况一览

 

截至2023年12月12日，药渡数据库显示，全球有81个狂犬病疫苗，包含25个上市疫苗^[1]。中国获批上市的人用狂犬病疫苗共有22种，根据所采用的细胞基质不同可分为：人二倍体细胞、Vero细胞（非洲绿猴肾细胞）、地鼠肾细胞及鸡胚细胞狂犬病疫苗等^[2]。根据 Frost&Sullivan 调研，2015 年至 2018 年，我国人用狂犬病疫苗市场的销售收入从 16.8 亿元上升至 28.4 亿元人民币，且预计将于 2023年达到 42.5 亿元，2018 年至 2023 年的年复合增长率为 8.4%。 尽管目前的狂犬病疫苗取得了成功，但存在一定的局限，如需要复杂的接种程序（5针或4针），接种费用高昂，异源蛋白和核酸引入等。因此，安全性更高、免疫原性更高、成本更低的mRNA疫苗和重组亚单位疫苗有望替代部分传统狂犬疫苗。目前全球布局了10个mRNA和2个重组亚单位人用狂犬病疫苗^[1]。

 此外，为了进一步降低狂犬病的发病率和死亡率，政府也颁布了一系列的犬类管理政策，规定饲养犬只应按规定定期接种狂犬疫苗。从其他国家的成功经验来看，狂犬病的防治从人转向动物是必然趋势，宠物用狂犬病疫苗市场规模有望持续扩大。中国兽用狂犬疫苗市场中，进口疫苗占比高达九成，有4家进口疫苗生产企业，国产宠物用狂犬疫苗有11家，未来宠物狂犬疫苗有较大国产替代空间^[3]。近岸蛋白以创新的蛋白原料和完善的服务为基础，为人用或兽用狂犬病毒重组亚单位疫苗和mRNA疫苗研发提供全流程解决方案。

狂犬病毒介绍

狂犬病病毒属于单股负链病毒目（Mononegavirales）弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）。我国目前主要流行 Rabies virus（RABV）。RABV是一种子弹形状的负链RNA病毒，有5种结构蛋白，包括核蛋白(nucleoprotein，N)、磷蛋白(phosphoprotein，P)、基质蛋白(matrix protein，M)、糖蛋白(glycoprotein，G)以及RNA依赖的RNA聚合酶大蛋白(RNA-dependent RNA polymerase large protein，L)，其中糖蛋白是病毒粒子表面的蛋白，在RABV感染宿主后结合细胞表面的受体帮助入侵，同时也能够刺激机体产生保护性中和抗体。  1. 狂犬病毒重组亚单位疫苗开发

1.1 早期研发

针对早期研发，近岸蛋白可以为候选分子设计、筛选及优化、免疫原性评价提供相关服务和产品。从免疫原性预测、病原体亚型覆盖、蛋白质结构改造、多联多价设计等角度，开展候选分子设计工作。除提供高通量抗原表达服务外，近岸蛋白还为各种筛选实验提供等。

1.2 CMC生产在疫苗生产过程阶段，近岸蛋白可以提供表达细胞株构建、工业菌株构建、发酵及纯化工艺开发等服务和GMP级全能核酸酶。  1.3 CMC质量控制在疫苗的生产和质控过程中，近岸蛋白提供FDA DMF备案的GMP级全能核酸酶BenzoNuclease^®（目录号：GMP-1707）及配套酶残留检测试剂盒（目录号：PA018），高效去除核酸残留。 此外，近岸蛋白还提供HCD检测试剂盒及数字PCR预混液，多种检测试剂可供选择。1.4 体外药效评估在疫苗的体外药效评估阶段，近岸蛋白可以提供生物学活性验证（细胞、小动物）、细胞与体液免疫评价相关抗原、抗体。 

狂犬病毒重组亚单位疫苗研发相关部分产品

货号	产品名称	应用
DA111	RABV Glycoprotein Antibody (5G10)	用于抗体评价，ELISA验证
DRA244	RABV Glycoprotein	抗原/免疫原标准品，ELISA验证
GMP-1707	BenzoNuclease®, GMP Grade	去核酸残留
PA018	BenzoNuclease® ELISA Kit	酶残留检测

 

验证数据

经SDS-PAGE验证，RABV Glycoprotein(货号:DRA244)纯度大于95%。

Greater than 95% as determined by reducing SDS-PAGE

 

经BLI验证，RABV Glycoprotein Antibody (5G10) (货号：DA111)与RABV Glycoprotein(货号:DRA244)结合的亲和力强。

Loaded Recombinant RABV Glycoprotein (Cat#DRA244) on HIS1K Biosensor, can bind RABV Glycoprotein Antibody (5G10) (Cat#DA111) with an affinity constant of 9.56 nM as determined in BLI assay

 

2. RSV mRNA疫苗2.1 早期研发

• 抗原/mRNA序列设计服务

基于上万种蛋白设计经验和文库优势，近岸蛋白可进行抗原设计，亦可对mRNA的UTR、密码子、Poly(A)尾、IRES序列优化等进行序列优化。

• 疫苗候选分子筛选确认

产品	服务
抗原/检测抗体	高通量基因合成
细胞免疫（RABV抗原）	高通量质粒制备
体液免疫评估（抗原）	高通量mRNA制备
质粒制备用PCR/克隆试剂	高通量LNP包封
	兔多抗制备
	免疫效价检测

 

2.2 CMC生产

近岸蛋白提供mRNA合成及修饰用原料酶及试剂。所有产品均采用药用规格原辅料生产，符合GMP规范的产品生产与质量管理规程，保障生产过程及所有原辅料可追溯。

 

产品特点：

• 为客户提供全套的原料放行方案，全套酶产品已完成FDA DMF申报备案，通过HALAL清真认证

• GMP级生产管理体系，设计50亿人份产能

• 100余家国内外客户的信任之选，其中2家客户产品获国内外EUA

   

质粒线性化	体外转录	加帽修饰	加尾修饰
BsaI	T7 RNA Polymerase	Vaccinia Capping Enzyme	E.coli Poly(A) Polymerase
BspQI	RNase Inhibitor	2´-O-Methyltransferase
XbaI	Pyrophosphatase, Inorganic (yeast)	SAM
	T7 RNA Transcription Enzyme Mix
	NTPs
	N1-Me-pUTP/pUTP
	CAP1 GAG/CAP1 GAG(3'OMe)

并提供CMC生产服务，涵盖大规模质粒制备、大规模mRNA制备、LNP-mRNA包封及工艺开发。 

2.3 CMC质量控制

产品	服务
加帽率检测样品处理试剂盒	完整性/加帽率/加尾检测
RNase H/RNase T1/Oligo(dT)磁珠	dsRNA/DNA等残留检测
原料酶/DNase/RNase残留检测试剂盒	包封率/粒径/zeta电位检测
E.coli DNA 残留检测试剂盒/兼容数字PCR平台qPCR Mix
NovoFast dsRNA ELISA Kit

 

2.4 体外药效评估

在疫苗的体外药效评估阶段，近岸蛋白可以提供生物学活性验证（细胞、小动物）、细胞与体液免疫评价相关抗原、抗体及对照用mRNA。

 

对照用报告基因

eGFP mRNA	Luciferase mRNA	mCherry mRNA
eGFP circRNA	Luciferase circRNA

 基于高品质原料与成熟的技术平台，近岸蛋白可为RABV、RSV、VZV、SARS-CoV-2、Influenza A/B、MPXV、HSV、ASFV、PEDV、PRV、PRRSV等人和动物的创新疫苗研发与工艺研究提供解决方案，欢迎咨询。
   

参考文献

1. 药渡数据库

2. NMPA

3. 《康华生物：“人+宠物”狂苗勾勒市场增长曲线》财通证券，2023年3月6日

4. Schnell MJ, et al. The cell biology of rabies virus: using stealth to reach the brain. Nat Rev Microbiol. 2010 Jan;8(1):51-61.