欢迎各位来到近岸蛋白科普小讲堂！应众多初入实验室，有各种问题想问但不敢问的“i类”科研er的请求，Novo君决定拓展一下自己的业务范围，为广大科研er打造一个学习小课堂，让各位“准科研er”快速掌握实验基础实验的原理及技巧！ Novo小课堂第一期，主题是大家耳熟能详的基础实验技术，qPCR技术！ qPCR是什么？ 

实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）也称qPCR。通过在DNA扩增过程中，每次PCR循环后检测荧光染料产物的方法，监测目的基因的实时表达情况。

  qPCR能做什么？ 

通过qPCR可以快速、准确地检测基因表达的变化，进一步了解基因在生物体内的功能和作用机制。

(1) 基因表达调控研究：qPCR可以用来定量检测不同条件下基因的表达量，进一步研究基因表达的调控机制。Eg：可用于研究生物体在不同发育阶段、不同环境状态下基因表达的变化。

(2)疾病诊断：qPCR可以用来检测人类或动物体内的病原微生物或疾病相关基因的表达量。Eg：检测病毒、细菌、真菌等的感染情况，以及检测癌症相关基因的表达量，用于辅助疾病的诊断和治疗。

(3)药物筛选：qPCR可以用于筛选药物对特定基因的影响。通过检测药物对基因表达的调控效应，可以寻找新的治疗靶点或评估已有药物的疗效。

(4)食品安全监测：qPCR可以用来检测食品中的致病微生物或基因改造成分等。Eg：可以使用qPCR来检测食品中的大肠杆菌、沙门氏菌、转基因成分等，以保证食品的安全性。

 

qPCR怎样定量基因表达

经过多年发展及技术改进，qPCR实验产生了两个流派：探针派（多为TaqMan）VS染料派。

染料派：染料派通常使用SYBR Green（一种结合双链DNA才发射荧光的染料）进行实验。在qPCR反应体系中，加入过量SYBR Green荧光染料，通过其可在掺入双链DNA后发射荧光的特性进行实验，通过过量的加入来保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

探针派：Taqman探针是最早用于定量的方法。在PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针上5’端含有一个报告荧光基团，3’端标记一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，无荧光；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

探针法与染料法的区别：

 

通过Novo君的介绍，大家是否对qPCR技术有了更加全面的理解呢？欢迎在评论区进行讨论！

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