CRISPR/Cas9作为一种细菌和古细菌长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，其高效的整合、切割能力一经发现，便受到科研工作者的关注。2012年，Jennifer Doudna和Emmanuelle Charpentier证明CRISPR/Cas9系统可以在体外切割双链DNA；2013年，张锋首次用CRISPR/Cas9系统在原核生物 (大肠杆菌) 中实现基因组编辑。
 

CRISPR/Cas9系统的出现为人类基因编辑提供了新的可能性，随着近年来分子生物学的快速发展，已广泛应用于众多领域。如：表达调控和基因功能的研究、细胞动物模型的构建、癌基因和药物靶点的筛选，在基因治疗中更是具有巨大的发展前景，为多种疾病提供了新的治疗方法。
 

CRISPR/Cas9技术的两个核心元素是sgRNA和Cas9蛋白，sgRNA为根据目标位点设计的“向导”序列，Cas9蛋白会根据向导序列进行靶向编辑，二者缺一不可。针对sgRNA，能够通过转染质粒在细胞内表达sgRNA或者借助载体将sgRNA通过转染的方法递送到细胞内；而Cas9蛋白，可以通过转染质粒在细胞内瞬时表达Cas9蛋白或者借助载体将编码Cas9蛋白的mRNA通过转染的方法递送到细胞内，进而在胞内翻译成Cas9蛋白；除此之外，还可以将Cas9蛋白通过转染技术直接递送到细胞内，则可省去胞内翻译的步骤，更快的完成编辑工作。
 

根据上述递送的形式不同，目前主流的CRISPR/Cas9基因编辑技术采用的方法有以下几种：

1. 质粒瞬转体系：采用sgRNA表达质粒和Cas9表达质粒（或者采用sgRNA+Cas9共表达质粒）共转染细胞进行编辑。

2. RNA瞬转体系：体外合成sgRNA及Cas9蛋白mRNA，通过瞬时转染技术将两者递送到细胞内，由细胞翻译合成Cas9蛋白进行编辑。

3. 蛋白瞬转体系(RNP体系)：体外将sgRNA和Cas9蛋白混合成为RNP复合效应物，再通过瞬时转染技术（脂质体或电转等）将复合效应物递送到细胞内进行编辑。
    

Cas9 RNP体系的优势

• 无外源插入基因。RNP体系避免了外源基因插入的风险，不容易引起机体的免疫反应。与mRNA相比，Cas9蛋白更加稳定，且形成的RNP复合物能够提高sgRNA或crRNA+tracrRNA的稳定性；

• 低脱靶率。质粒转染或病毒感染方式常导致Cas9蛋白在细胞内持续表达。RNP复合物转导入细胞后，Cas9蛋白在72小时内即会降解，降低脱靶效应；

• 操作简便快捷。在体外将Cas9蛋白和sgRNA或crRNA+tracrRNA混合，转导后即可进行基因编辑。
   

近岸蛋白提供GMP级Cas9与科研级Cas9/Cas12a/Cas13a等Cas家族高品质蛋白产品，为基因编辑保驾护航。
 

产品优势：

• 纯蛋白体系，无外源基因引入风险。

• Cas9蛋白降解速度快，有效降低脱靶效应

• 无动物来源培养基培养

• 内毒素低，无核酸内、外切酶及RNA酶残留

• 在蛋白两端加了核定位信号（NLS），蛋白可进入细胞核内进行基因组编辑。

• 体外切割效率高于90%
   

GMP级产品通过严格的质检标准，生产与质量管理符合GMP规范，保障生产过程及所有原辅料可追溯。
 

项目	标准
外观	本品为澄明溶液
可见异物	符合规定
pH	应为6.9~7.9
纯度	SDS-PAGE电泳法，还原型应不低于95.0% SEC-HPLC法，非还原型应不低于95.0%
分子量	还原型应为163±16.3kDa
蛋白质浓度	BF法，9.5~10.5mg/ml
活性	体外切割效率，300ng可进行90%切割
细菌内毒素	应小于10EU/mg
宿主菌蛋白质残留量	不高于蛋白质总量的0.005%
外源性DNA残留量	每1mg蛋白应不高于10ng
核酸内切酶残留	底物的降解不超过10%
核酸外切酶残留	底物的降解不超过10%
RNA酶残留	底物的降解不超过10%
支原体检查	支原体试剂盒法，应为阴性
重金属残留	应不得超过10ppm
无菌	符合规定

GMP级产品生产标准

数据展示：

高纯度：SDS-PAGE&SEC-HPLC双重验证，蛋白纯度≥95%
 

切割活性高：体外切割效率≥90%
 

细胞编辑效率高
 

将不同Cas/sgRNA RNP复合物通过电转方式递送至293T细胞，48h后收集细胞，抽提基因组DNA，进行体外切割测试。
 

同条件下，近岸蛋白的Cas9蛋白体外切割效率优于其他同类品牌。	近岸蛋白的Cas9蛋白在编辑效率和敲除得分上都优于竞品。

近岸蛋白基因编辑系列产品：
 

目录号	产品名称
GMP-1701	Recombinant Cas9 Nuclease, GMP Grade
E365	NLS-Cas9 Nuclease
E369	sgRNA In Vitro Transcription Kit
E370	sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit
E366	Cas9(D10A) Nickase
E367	Cas9(H840A) Nickase
E368	Cas9(D10A，H840A)Nuclease
E373	LbaCas12a Nuclease
E379	NLS-Cas9-EGFP Nuclease
E381	LwaCas13a Nuclease
M017	T7 Endonuclease I

*小贴士：GMP级Cas9为医药研发企业专用产品，表中无特别标注GMP则为科研级产品。