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NovoScript® Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA Purge)
品牌:近岸蛋白(Novoprotein)
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DNA Marker的选购与问题解答
人阅读 发布时间:2012-02-07 10:15
一、novoprotein DNA Marker特点:
- 每个条带均为单独定量制备
- 可以用于 DNA片段大小和浓度的判断
- 带型清晰明亮、条带大小准确,覆盖范围广(100bp-10kb)
- 明暗条带优化比例,条带更美观
- 内含上样缓冲液和指示染料可直接上样、快捷方便
- 添加了特定稳定剂,稳定性高,于-20℃可保存两年以上
- 适用于 TAE 和 TBE缓冲体系
- 可以任选指定条带定制DIY DNA Marker
- 价格优势明显
二、如何选择novoprotein DNA Marker
如图为novoprotein 在售的18种DNA Marker,可以根据您的目的片段大小,选择附近条带较密的marker,这样对目标片段大小的估计较准确。两个不同目的带同时电泳时,尽量选择同时可以标定两个目的片段的marker。如果您的实验有特殊条带需求,我们还可以为您提供DIY DNA Marker定制服务。
(DNA Marker电泳图)
三、novoprotein DNA Marker使用方法及注意事项
使用注意事项:
- 建议选择合适浓度的琼脂糖凝胶(DNA片段越短胶浓度越大:<0.5k,胶浓度1.2-1.5%;>10kb浓度,0.3-0.7%;0.5<DNA<10kb,胶浓度为0.8-1.0%)
- DNA Marker使用前彻底化冻并混合均匀
- 取5 μl直接加入琼脂糖凝胶的加样孔中(约每1 mm点样孔宽度加1 μl)进行电泳
- 低电压下不受场强影响,分离效果好。一般电压4-10v/cm,大片段电泳时注意控制电压。
- 及时更换电泳缓冲液
保存注意事项:
4℃保存3个月以上,-20℃保存2年。(如客户电泳使用频繁可于室温随时使用,但我们推荐客户于4℃存放)
DNA Marker 加样时尽量使用新枪头,避免核酸酶污染
四、DNA Marker使用问题解析
- 条带模糊
原因 |
解决方案 |
凝胶浓度不合适 |
根据片段长短选择合适的凝胶浓度 |
电泳缓冲液缓冲能力差 |
反复使用后缓冲能力下降需及时更换 |
电压过高时间过长 |
电压不应该超过20V/cm,电泳温度应该低于30℃ |
上样量过多 |
减少上样量以marker条带为准条带更清晰 |
电泳胶质量不好 |
选择好胶粉充分溶胶 |
Marker降解 |
防止核酸酶污染,确保保存温度和时间 |
-
亮度不够或不均一
原因 |
解决方案 |
上样量少 |
可适度增加上样量 |
EB浓度低 |
按照要求加入EB,一般为终浓度0.5-1ug/ml |
凝胶不均匀,胶质过厚 |
充分煮胶至透明无杂质和丝状物,倒胶均匀适量 |
电泳胶亮度不均一 |
电泳时间过长时,琼脂糖胶前部EB会迁移至胶后部,造成前后DNA染色亮度不一,可在电泳开始前,在琼脂糖胶前部,靠近电泳槽阳极附近加入少量EB并混匀。 |
-
条带污染
原因 |
解决方案 |
污染核酸外切酶至DNA降解 |
使用灭菌的枪头,及时盖紧管盖 |
点样时污染 |
加样时及时更换枪头 |
详细说明参见公司网站:www.sinobio.net
五、Marker条带比较分析
对市场上热销DNA Ladder 2000同类型产品调查对比见下表:
公司名称 |
次数 |
目录价 |
定量条带(标称) |
普通条带(标称) |
备注 |
Takara |
40 |
85 |
30ng/ul |
10ng/ul |
5ul电泳,亮带150ng,其余50ng |
康为世纪 |
50 |
48 |
30ng/ul |
10ng/ul |
5ul电泳,亮带150ng,其余50ng |
东盛 |
60 |
90 |
30ng/ul |
15ng/ul |
5ul电泳,亮带150ng,其余75ng |
SinoBio |
50 |
70 |
20ng/ul |
10ng/ul |
5ul电泳,亮带100ng,其余50ng |
全式金 |
50 |
70 |
20ng/ul |
10ng/ul |
5ul电泳,亮带100ng,其余50ng |
天根 |
50 |
90 |
17ng/ul |
8ng/ul |
6ul电泳,亮带100ng,其余50ng |
由表中可以看出,我们的marker浓度在市场上位于中等水平,从价格来看也比较有优势,且我们的活动力度较大。(目前marker产品,买二送二)
为了取得美观的DNA Marker电泳分布图谱,我们在产品制备过程小幅度调整了非定量条带的浓度,结果使定量条带更醒目,相对其他条带更易区分。
-
Marker条带电泳图谱比较
- 1、Novoprotein新产品DNA Ladder 2000 plus II
- 2、Novoprotein DNA Ladder 2000
- 3、T 1公司同类型 Marker DL2000
- 4、T 2公司同类型 Marker D2000
(1%琼脂糖胶,2ul电泳可见novoprotein DNA marker条带清楚,带型美观。)